10.00 为什么miRNA茎环反转录扩增出许多非特异性条带?

项目进度

  • 发布需求

    2017-09-26

  • 威客交稿

    2017-10-16

  • 3

    雇主选稿

    2017-10-21

    距离选稿结束时间剩余

  • 4

    公示期

  • 5

    评价

需求描述

新人一枚,利用茎环反转录mirna—pcr凝胶电泳(3%,80v电压)测试是否能扩增出目的条带。然而用普通的反转录与pcr条件,扩出来的非特异性条带很多,可是确没有50bp的目的条带。按照茎环反转录原理,cDNA已经可以算是特异性cDNA了,而且,下游引物的位点还位于茎环反转录引物的环上,所以照理论分析只能扩增出目的条带啊,可是为什么会这样!!!


精准对接

投稿人: 往圣科技

重点问题就是:得不到目的条带,但是扩增出其他的条带!对于PCR而言,引物和模板是关键,引物的特异性,模板的准确性。模板是通过逆转录得到的cDNA,首先看下,cDNA这个是否有问题,逆转录的过程中,得到的cDNA是否含有目的基因段。其次是PCR引物设计,引物的特异性直接影响P的结果。看你发的,引物特异性做过检测,那应该没什么太大问题,着重再分析下逆转录得到的cDNA。具体的实验操作问题,可以联系我公司(广州往圣生物科技有限公司)实验技术服务,电话:18998395636(微信同号)

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