10.00 急求!间接ELISA法建立,非特异性反应特别高

项目进度

  • 发布需求

    2017-11-29

  • 威客交稿

    2017-12-19

  • 雇主选稿

    2017-12-24

  • 公示期

    2017-12-23

  • 5

    评价

需求描述

这个elisa方法是准备建立起来检测人体内的一种抗体,包被的抗体是基因工程生产出来的该抗体的抗原,一抗是血清,二抗是辣根结合的羊抗人IgG抗体。

实验步骤:100ul抗原包被4℃过夜→洗涤(5次,每次3min)→200ul5%BSA封闭37℃1h→洗涤→100ul血清孵育37℃1h→洗涤→100ul二抗稀释液孵育37℃1h→洗涤→TMB显色20min后终止。

实验结果:1.前几次摸条件的时候发现阴阳性血清有一定的区别,但是空包被液包被的板子od值在一直很高。显色度随着血清稀释程度下降明显,随着抗原包被液稀释程度下降不明显。

2.考虑到可能是封闭问题,换过5%脱脂奶粉,基本上没有特别大区别,增加时间到2h,也没有特别大的区别。把BSA的浓度从0.5%一直增加到15%,OD值稍有下降(0.4→0.3)但远没有达到理想;

3.做过交叉实验,发现二抗与抗原包被液也有非特异性反应,不加血清也显色(0.64)。

问题:1.目前来说封闭的问题怎么解决?因为是这方便的小白,实验室的师兄师姐也表示之前BSA和脱脂奶粉就够用了,不知道有没有好的建议;

2.二抗与抗原包被液的特异性反应如何解决?是因为二抗的问题吗?需不需要换二抗?

跪求大神们指导!!!


精准对接

投稿人: 科研扫地僧

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投稿人: 清风有信

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投稿人: 6099255

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显示 1~3 项 共 3 个投稿

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