10.00 求助:大鼠原代心肌提取问题

项目进度

  • 发布需求

    2018-04-15

  • 威客交稿

    2018-05-05

  • 雇主选稿

    2018-05-10

  • 公示期

    2018-05-10

  • 5

    评价

需求描述

本人实验急需状态良好的原代心肌细胞,可是自己摸索了1个月还是有很大问题,提出的心肌不贴壁,想请教一下论坛里的各位大神。主要有3个问题:

1.我看很多文献和网友分享的经验中都用的是【胰酶和二型胶原酶】混合液,我最后这次使用的酶是【0.0625%胰蛋白酶(含EDTA)+0.1%Ⅱ型胶原酶】,可是有个问题:二型胶原酶说明书要求必须有Ca和Mg离子激活,但胰酶却不能有Ca和Mg离子,而且EDTA会螯合Ca和Mg离子;这就很矛盾,不知道胰酶和Ⅱ胶原酶混合液到底应该用D-Hanks还是Hanks配置。如果我用Hanks配,不加EDTA,那么可以保持胶原酶活性,但胰酶活性会被抑制。想请教下最好用什么配置?

2.原代心肌细胞如果难贴壁的话,是否需要提前对培养皿和细胞爬片进行包被?我看网上主要有三种包被:明胶, 多聚赖氨酸和鼠尾胶原,请问这三种包被有什么区别呢?对于原代心肌来说是否需要,哪种最好呢?

3.多次分步消化的话,一次10min,需要5,6次的话时间会很长,期间先被培养基中和的上清一直放在超净台里吗?还是需要先放37度培养箱里保温呢?

谢谢大家了


精准对接
二等奖

投稿人: jlz10841003

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