20.00 求高手如何将cd4细胞培养成th17细胞的具体过程

项目进度

  • 发布需求

    2016-08-30

  • 威客交稿

    2016-09-19

  • 雇主选稿

    2016-09-24

  • 公示期

    2016-09-24

  • 5

    评价

需求描述

本人想从小鼠脾脏中提取T细胞,然后经磁珠分选出CD4+T细胞,然后在体外培养成th17,再进行下一步实验,但具体有几个问题一直不太懂!希望做过这方面实验的高手指点

1.美天旎磁珠分选CD4+T细胞时,是应该正向分选还是负向分选呀?看有的文献说如果正向分选,可能会有一些抗原提呈细胞的cd4也是阳性的,但如果用cd4+cd25+的负向筛选,选出cd4cd25-的,可能纯度不高,而且双抗体筛选具体怎么操作?是先筛出cd4吗?

2.筛选出cd4后,使其培养分化成th17时,看有的文献是先包被anti-CD3抗体4度过夜或者37度2小时,有的是单独包被cd3,还有的也同时加入anti-CD28,包被的目的是起什么作用?是否需要一起包被cd28抗体?包被后加入anti-IFN-gamma,anti-IL-4, 重组的IL-6、IL-23、TGF-beta, 看有的文献是培养3天-5天后,再加入IL-2,但也有的未加入直接进行下一步il-17的检测,想问一下具体加入IL-2的目的在哪?而且有的培养时还加入IL-1b,需要加入吗?IL-1b也不是th17细胞分化的必备条件呀?

还有的文献是先用anti-IFN-gamma,anti-IL-4, 重组的IL-6、TGF-beta培养3天后,再加入IL-2

3.提取小鼠脾脏的cd4好 ,还是淋巴结的cd4好,哪个纯度更高些?书上写的是淋巴结中T细胞含量更高,但文献中多数用的是脾脏,是因为淋巴结取样时不好取吗?比较小?

希望做过这方面实验的人指点!


精准对接
一等奖

投稿人: 科研扫地僧

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二等奖

投稿人: 李博

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显示 1~2 项 共 2 个投稿

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