20.00 DNA提不出来,什么原因?

项目进度

  • 发布需求

    2016-09-09

  • 威客交稿

    2016-09-29

  • 雇主选稿

    2016-10-04

  • 公示期

    2016-10-04

  • 5

    评价

需求描述

用的生工细菌基因组DNA提取试剂盒,步骤:

 1.革兰氏阳性细菌:取1ml蒸馏水,加入1.5 ml离心管中,从羊血平板上划一个菌落与离心管中,吹打混匀,室温8,000 rpm离心1 min,弃上清,收集菌体。加入180 µl溶菌酶溶液(使用前将相应的溶解酶加入到Enzymatic lysis buffer中,配置成20 mg/ml的溶解酶溶液)重悬菌液,37°C水浴60 min。再加入400 µl Buffer Digestion溶液,震荡混匀。65°C水浴1.5 hrs至细胞完全裂解。

2.  加入200 µl Buffer BD,充分颠倒混匀。-20 °冰箱放置5 min。

3.室温10000rpm离心5min,将上清液转移至新的1.5ml离心管中。

4.加入等体积的异丙醇,颠倒5次使之充分混匀,室温放置2min,室温10000rpm离心5min,弃上清。

5.加入1ml 75%乙醇,颠倒漂洗2min,10000rpm离心2min,弃上清。

6.重复5一次。

7.开盖室温倒置5-10min至残留的乙醇完全挥发。

8.得到的DNA用50ul TE buffer溶解,保存于-20°。

问题出在步骤1 

第一次:37°水浴后,离心管内的液体出现白色沉淀(外观好像蛋清加热以后的样子,但是比它更透明),颠倒混匀后变成豆腐渣状,震荡后也不消失,之后PCR发现也没有DNA条带,。

第二次:考虑出现沉淀可能是第一次菌体浓度太高,所以这次就控制了细菌浓度,只划了一个菌落。这次37°水浴后没有沉淀出现,但是65°水浴过程中再次出现和第一次一样的白色沉淀。同样,异丙醇加入后没有DNA析出。

请教各位大神,为什么会出现这种情况,按照说明,水浴完以后,离心管内的液体应该是澄清的。为什么会有沉淀出来?DNA也没有提出来,为什么?


精准对接
一等奖

投稿人: 科研扫地僧

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二等奖

投稿人: 辉哥

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三等奖

投稿人: q77

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