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  • 质粒构建问题
  • 北京市东城区东华门街道
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  • 构建质粒能不能直接将质粒上某一段序列反过来 我是想将sv40这一段序列反向 不知道可以不
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  • 测序结果求教
  • 广东省广州市白云区
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  • 用载体构建质粒导入大肠杆菌,挑克隆摇菌后提质粒送去测序,结果发现同一个基因两个测序结果不一样,一个确实一个碱基,一个多了一个碱基,请问原因是什么啊,谢谢大神
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  • 进行细胞实验,收集细胞后,提取RNA并进行浓度和纯度检测,结果都可以,然后用 one step试剂盒进行RT,机器为罗氏LC96,反应条件也是之前摸好的,但结果却看不懂了,前面检测不了荧光信号,只有最后才有一点,不知道问题出
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  • 请教各位大侠,采用2- Δ Δ Ct法计算mRNA表达量的时候,每个样本的目的基因通过内参校正之后,得到Δ Ct。组内平均得到平均值±标准差。组间比较的时候,只能是干预组的Δ Ct平均值减去对照组的Δ Ct平均值吧?如果是这样的话,
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  • 1.在网上查找的信息以及论文来看只有miRNA与蛋白质,lncRNA,mrna的相互作用并没有miRNA之间的相互作用。2.构建共表达网络要计算基因之间的相似性对吗?那可以构建miRNA-miRNA的共表达网络吗?
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  • 各位大佬们好,本人刚开始做MDSC,有好多概念不是很理解。老板让我做MDSC的增殖实验。但是喔找个好多文献都没有关于MDSC的增殖实验说法,只有MDSC扩增后频数改变流式等方式检测。我就想问问MDSC可以用CFSE做增殖实验吗?有相
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  • 本人最近在做剂量依赖性实验,是将质粒转染到细胞中,分别设有vector GFP 未处理组以及目的质粒这四组,vector GFP组分别转染300ng,目的质粒组依次是300 250 200 150 100 50,请问是不是要保持所有组分总的质粒量一致,即300ng 是不是
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  • 大概从4月份开始,miRanda数据库就无法打开了,有哪位朋友知道怎么回事吗?还是数据库签到别的网址了呢?我需要进行miRNA与靶基因预测,谢谢!http://www.microrna.org/microrna/home.do
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  • 突变PCR,引物高GC,Tm平均值为71.71退火后电泳没条带,加了1,2,4%三个浓度梯度的DMSO68度退火后还是没条带,如何解决?谢谢!
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  • 最近在养293细胞和CHO细胞,两个细胞经过驯化至悬浮状态后转化到摇瓶中出现问题1)293细胞是尝试过2/3/4*10的5次方接种细胞量,但是都无明显增殖;2)CHO细胞是刚转入摇瓶第一代增殖正常,传代后就开始基本不增殖;细胞在离心
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  • 我最近提精子RNA浓度可以但 A260/A280比值一直上不去,一般在1.5-1.65之间,这是什么问题,求各位大师指导?操作步骤如下:1、将冷冻精子从液氮罐中迅速取出后,在37 °C水浴锅上30S内解冻到1.5mL无RNA酶的离心管中(样品量160ul),
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  • 想从ENCODE数据库里面下载关于转录因子的CHIP-seq的数据,搜了网上的资源都看不懂。哪位大神可以帮帮忙有详细简明的教程。
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  • 临床实验做的患者全血circRNA及mRNA的基因芯片。(没有测miRNA)目前发现circRNA有几百个有显著统计学差异,mRNA有几百个有显著差异。如何将circRNA与mRNA串起来,把故事说圆是目前的困境。circRNA除了对miRNA的海绵吸附作用,应该还有
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  • 双酶切空载pGEX-6p-1,37℃酶切3h,切完只有这个条带:然后做了对照,两组不加限制酶但加了10×酶切buffer,一组不加限制酶和10×酶切buffer,都是37℃酶切3h,结果如下:结果很奇怪,像是被核酸酶降解? 提质粒用的5mL DH5α菌液,提
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  • 请问大家希特林缺陷病中的SLC25A13基因基因突变c.IVS6+5G>A、c.615+5G>A怎么读出来???还有851del854是否可以读为第851位碱基的缺失突变??1638_1660dup23读为第1638位碱基的重复突变??感激不尽!!!
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  • 想从石蜡切片中提取DNA,首先第一步就是讲组织从玻片上溶解下来,想问下大家都是用什么方法的,直接用手术刀刮下来吗? 看到石蜡提取试剂盒里写着二甲苯溶解,想问下玻片用二甲苯溶了后是去除石蜡的 怎么把组织溶下来放
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  • 本来想验证lncRNA、miRNA和mRNA三者在我研究的模型里表达量的相关性,请问在反转录和扩增过程有什么不同吗?周围做实验的有人都用同一种反转录试剂盒,有人说需要用miRNA的专门的反转录试剂盒?这两者有什么区别吗?另外miRN
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  • 最近看到一篇文献,关于乙脑全长感染性克隆作者将全长分为3段分别进行扩增,通过融合pcr相互连接,再上载体但我发现片段1的上游引物与片段3的下游引物分别添加了很多碱基,想咨询大家它们是什么p1f:ATGCGGCCGC+T7启动子+乙脑
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  • 请问下如何查找某一组织(如心脏、大脑、肾脏等)表达的所有基因?
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  • 超表达载体构建
  • 天津市和平区体育馆街道
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  • 求助:1超表达载体构建引物如何设计,2 目的基因的CDS序列有五千多,反转录后会不会碱基缺失或者突变,我之前用CDS序列前后数了15个碱基作为引物,之后连接T载测序发现片段中间缺失了几十个碱基,是不是我方法有问题,求
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