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  • 有没有做过成年鼠原代星形胶质细胞培养的小伙伴呢?我取的是海马组织,剪碎之后 加胰酶消化30min 1000转离心15min 弃上清 加入培养基(DMEM/F12 10%FBS 2%B27 1%PS)接种到已孵育过PLL的培养瓶中,看不到细胞贴壁想求教有做过成年鼠原
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  • 第一张图是上午我做pcr扩增 第一个是marker 我的目的基因94bp 前四个是目的基因 后四个是内参基因 目的基因条带暗 marker也没第二张图是下午扩增的 第一个是marker 前六个是目的 后面几个是内参 但我的目的基因条带感觉都有点暗
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  • qpcr的问题
  • 广西南宁市上林县
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 63人参与 | 2人投稿
  •   17天后投稿截止
  • 最近做了几次qPCR,得到的曲线还可以,但是C值变化很大,有时候是对照组高,有时候是实验组高,为什么呢?做的三次PCR用的不同公司的药品,是因为这个吗?
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  • 目前在做定点突变,PCR产物浓度挺高的,条带也是正确的,但是就是单克隆生长较少甚至没有。模板链直接转化是有单克隆生长的,考虑是不是由于定点突变产物是线性的?如果把线性产物环化,转化效率会不会高一些?
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  • 用TRIZOL法提细胞RNA,其他细胞都ok,有一个细胞提好多次(做了不同细胞量的对比),反转录PCR,GAPDH都批不出来,求大神把脉。
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  • 多肽合成时候,用到的氨基酸经N-Fmoc-amido-dPEG4 acid和levulinic acid耦合是什么作用呢?文献的原话:All amino acids, N-Fmoc-amido-dPEG4 acid and levulinic acid (Lev) were coupled with coupling reagents atroom temperature for 45 min each.
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  • 用CRISPR-Cas9技术进行基因敲除,用错配酶法 (Surveyor) 检测结果显示阳性,即Cas/sgRNA结果有效。能不能不做western blot检测蛋白表达,只用错配酶法的结果就说明该基因已经被成功敲除了呢?
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  • 学习抑制性消减杂交的原理中,说产物a(单链tester cDNA)没有引物结合位点所以不能扩增。这一点不能理解,产物a的一端不是也有接头吗,为什么引物不能识别?求大神指教!
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  • 各位高手好,小弟做SNP位点功能效应检测,位点位于内含子区域。质粒转染适不适合用双荧光素酶检测报告基因,如果可行,做之前是否需要用qPCR测试下基因的表达情况,如果需要,麻烦指点一下咋做,谢谢!
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  • 最近在用同源重组的方法构建质粒,目的片段A加到载体1和载体2上,涂板后菌落PCR均检测不到目的片段。而目的片段B和目的片段C很轻松就能加到载体1。片段A已测序正确,使用试剂相同,三个目的片段加的同源臂相同,双酶切载
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  • 如题,构建某基因点突变质粒转入细胞株中研究其功能,但细胞株基因组野生型的也在那,会对功能有影响吗?换句话说,细胞株基因组野生型的基因在那,突变的质粒转进去有何用?问题可能有点傻傻的,但我还真的不懂,求
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  • 我用NCBI查了我目的基因的cDNA序列是2881个碱基,但是查出的蛋白质序列却有1124个氨基酸,两者之间并不是三倍左右的关系,请问各位高手为什么会出现这种问题呢?种属和对应的基因库编码都是一样的,也不知道为什么~正在完成
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  • 我最近做不同时间段0h,24h,48h的感染实验,怎么计算某个基因的相对表达量呢?内参为actin,是24h,48h都与oh对比吗?
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  • 本人课题是做小鼠脊髓,提取RNA后测量浓度只有70-80ng/ul.跑的荧光PCR,每次内参CT值都有25左右,目的基因也都是在二十几,PCR加大样本量也没用,对照组是正常无CT值的,请问这种情况下我该如何调整,本人刚开始接触试验,求各
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  • 请问如果构建某个基因的表达质粒,如果把基因的起始密码子ATG其中的某个碱基换成其他碱基,那突变型的表达质粒是不是很有可能无法表达该基因,请问为什么?
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  • 求助各位大神,chip qpcr 阳参没有出来阳参是试剂盒里的Anti-RNA聚合酶,阳参没出来是怎么回事呢?
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  • 如题,有哪位大侠知道WPRE的序列?最近实验要WPRE和polyA的效果是一样的吗?有了WPRE是否就不需要polyA了?
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  • 我在NCBI上下载一段全长序列,但是与其它物种的同源基因比对过程中发现,该段目的基因相对其它同源基因而言少至少60bp。根据经验而言,这段序列长度算比较短的。但是NCBI已标志是全长序列,所以请教大神们,这种情况下,
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  • 转染问题
  • 浙江省杭州市上城区
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 164人参与 | 2人投稿
  •   已结束
  • 最近用santa公司的siRNA做的转染情况,后面的WB验证,基因表达没有变化。细胞用的人包皮提取的成纤维细胞,传到第5代,融合约80%来做的实验。因为第一次做转染,不知道是问题到底在哪?是细胞的问题?还是小干扰RNA转染效率
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  • GAPDH-F AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC GAPDH-R GGGGTCATTGATGGCAACAATA 做Qpcr,内参组要么没有数值,要么差异很大
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显示 1~20 项 共 249 个需求
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