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  • 请问大神,蛋白上样量指的是每个孔的上样蛋白浓度吗?还有一个问题,在电泳恒压时,为什么跑着跑着变成了恒流,而恒流转膜时,电压却一直上不去,设置的120mA恒流,电压一直在34V左右,这是为什么呀,是因为缓冲液的问题
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  • 在37℃,1mM IPTG条件下诱导表达蛋白在沉淀里面,电泳大小差不多为41kD,28,16℃大量表达之后,沉淀和上清里面都有表达,但是大小为38kD左右,(破碎的时候时间长了一点,底部出现黑色沉淀,应该是蛋白被烧焦了),请问一下蛋
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  • 如下图所示:我用10%的胶分别跑了上面两种20多KD的分子,结果条带都非常窄,呈一条细线难以区分,重复几次之后结果大致都是如此,请大家指点一下是什么原因造成的,又该如何解决呢?
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  • 做western实验,电泳60v,30min/120v70min,转膜湿转, 300mA,50min,蛋白转膜预染marker转到膜上了是不是蛋白就转过来了呢,求教我的蛋白没有条带是怎么回事,目的蛋白34kd,97kd,分离胶配的10%,浓缩胶5%,内参有条带,是不是说你问题在转
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  • 我的目的蛋白预计大小17kD,但是考染后在11kD处出现一条很粗的条带,请问有哪些原因能导致目的蛋白变小的吗?万分感谢!另外:1.每次跑胶整个泳道会有发虚的情况,如图,尝试过低温了,效果还不是很好,请问有什么其他办
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  • 请问可以通过过表达目的蛋白,不做IP,直接跑WB后染整块胶看差异条带,再做质谱分析看这些差异蛋白从而寻找目的蛋白的影响蛋白吗?有战友见过相关文献吗
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  • western求助
  • 西藏拉萨市城关区
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  • 我western做的是磷酸化的cx43蛋白,分子量43。一抗是ab家的,比例是1比300昨天做出来如一,我优化了实验,把转膜从原来200mA 90min,改成了60V 2h,结果如图二,求各位大神的意见,觉得我还需要哪里改进一下,我上样从原来15ul改成
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  • 我使用bl21iptg诱导蛋白表达,分子量11kd,诱导后有明显的目的条带,三次超声裂解后溶于8M尿素,然后过柱纯化。三次超声SDS胶显示蛋白存在于沉淀中,500ml诱导的菌量最后溶于10毫升尿素,10毫升蛋白悬液加入纯化柱后为一次纯化
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  • WB转膜
  • 广东省广州市越秀区
  • 10.00
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  • 385人参与 | 3人投稿
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  • 我的转膜条件是湿转横流280MA,1.5h转出来,挨着膜的滤纸有红色marker以上的条带,第二张有红色以下的条带,第三张有最小的绿色的条带,膜上的所有marker颜色都很显,是转过了吗?我的分子量是106kd,38kd
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  • 质粒是Pet-41a(+) 插入了目的基因pEGF,这些前期准备我百分之百确定没问题,而且密码子也优化了,因为是在公司合成的,阅读框架什么的都没问题,正常导入了大肠杆菌BL21,我也确定已经导入了,在卡纳抗性下能生长,总之前期这
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  • 本人做WB这两次都出现了目的条带拖带,或者成了一片的状态,根本不能称之为条带了,但是转膜过程中Marker显示很好,但是有一张膜出现下面的Marker拖带,请问各位大神这是什么原因,是转膜问题还是胶的问题?求指点
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  • chip实验
  • 福建省福州市仓山区
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  • 1102人参与 | 3人投稿
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  • 我现在要做chip实验,目前转录因子没有现成的抗体,所以送出去制作。我想问抗体回来以后有4个小样,应该如何选择?
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  • 我打算寻找A蛋白的泛素化位点,目前已知A蛋白可以通过泛素化途径降解。通过共转染flag-A质粒与HA-ubiquitin各位点突变质粒(HA-K6,HA-K11,HA-K27,HA-K29,HA-K33,HA-K48,HA-K63,HA-WT,HA-KO),用flag抗体做IP,HA抗体检测泛素化,发现都有条带。
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  • 急求对“神经有毒性作用”的“HIV-1 TAT” 蛋白质的氨基酸序列,哪位大神知道怎么寻找吗?希望有相关文献支持,非常感谢!
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  • western曝光问题
  • 江苏省南京市下关区
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  • 473人参与 | 1人投稿
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  • 步骤如下,先把膜控干,然后放到自动曝光仪器推拉板中间,涂上ECL发光液,然后关上仪器门,立即点击曝光。上样前已定量,丽春红染色均匀,但有时候曝光内参明显不均匀(可排除内参本身不一致的问题),如果将膜用PBS洗
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  • CHIP实验问题
  • 江西省南昌市东湖区
  • 10.00
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  • 最近开始学习CHIP实验,固定细胞使其蛋白与DNA结合时用37%的甲醛至终浓度为1%,请问甲醛可以用4%的多聚甲醛代替吗,甲醛和多聚甲醛在固定细胞的应用上有什么区别吗?
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  • 请教:有什么办法可以单独分离培养上清中的分泌型蛋白,而不含或尽量少含外泌体的?另外一个问题,用ELISA检测培养上清中的某个蛋白成分,测出来的可能会是外泌体中的蛋白么,还是只是测到分泌的游离可溶性蛋白,因为没
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  • 编辑部意见:I can not find that you have a proper identification of the sugar you call aminogalactose. Please determine this in a better way. Secondly, if you consider resubmitting the paper, please give only one digit for the ratios of your monosaccharides, and also determine the linkages you
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显示 1~20 项 共 58 个需求

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