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  • 本人想从小鼠脾脏中提取T细胞,然后经磁珠分选出CD4+T细胞,然后在体外培养成th17,再进行下一步实验,但具体有几个问题一直不太懂!希望做过这方面实验的高手指点1.美天旎磁珠分选CD4+T细胞时,是应该正向分选还是负向分选
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  • 目的蛋白B分子量在70kD附近,Input可见条带,IP后条带变浓,但是IgG对照抗体或者是只加Beads不加抗体在相应位置也有条带。这样的结果能用吗?是不是说明这个蛋白粘性太强?
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  • 刚开始做transwell侵袭实验,做了两次但总是失败,完全没有看到细胞穿过,很是苦恼不知道为啥,我的操作步骤如下,请各位前辈指教:1. 将冻存于-20度的matrigel 4度过夜,变成液态,使用前涡旋保证溶解均匀。用无血清培养基
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  • qPCR问题,求指教
  • 北京市东城区东华门街道
  • 15.00
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  •   冻结中
  • 不知道问题出外哪里,有两条峰的那个是内参,求各路高人指点迷津!
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  • 各位老师,请问大家都怎么提取外泌体里面的RNA呢,我用酚氯仿提取的时候很奇怪,trizol加进去就卷成一圈了,很难溶解的样子,最后提取出来浓度只有几个ng/μl,然后用凯杰的RNA mini kit试一下,提取出来浓度高一点,有五六十
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  • 求助人精子RNA提取方法,我用过普通细胞提取RNA的方法,效果不佳,提取后OD值260/280始终低于1.8。请教各位大神,有没有人精子RNA提取的详细方法,谢谢。
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  • 请教预测上游miRNA
  • 北京市东城区东华门街道
  • 20.00
  • 诚意金悬赏
  • 562人参与 | 4人投稿
  •   冻结中
  • 目前我有一个在癌症上上调的靶蛋白,我想寻找他上游的miRNA 如果通过生物信息法,通过他的反转录的mRNA,寻找相关结合位点,然后预测mRNA,然后证明他调节靶蛋白
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  • 求教各位大神,小女子是化学专业的,用到几条DNA链做探针,首先需要进行杂交,DNA链是参照文献设计的,不知道为什么一直杂交不上。以上是我的三条DNA链,杂交的时候始终只能获得S分别和A链或者S和B链,A和B不能同时结合到
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  • 我用试剂盒对甲基化DNA进行亚硫酸盐处理,纯化回收后的想进行浓度测定,请问各位大神专家有什么好的建议?我因为后续要做线性,所以必须进行浓度测定(本人是做方法学的),但是看文献都是处理后就进行下一步,最后就
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  • 请问如何在测序结果中找到目标SNP点?以DNAMAN软件为例,我目前是思路是这样,但是貌似工作量太大1,根据自己所用的引物blast出理论所得原始序列,并保存为dnaman的比对序列2,再到rs00000(举例)位点查到比对得到再自己的上述
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  • 大家好,现在准备要做PCR-RFLP,有SNP位点的rs号,比如rs3136586,怎么得到这个SNP位点附近的序列及其他信息,怎么用primer5设计酶切及引物?
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  • 我最近在做甲基化实验,DNA用Zymo reserch公司的EZ DNA Methylation-Gold Kit试剂盒做了C/T转换后,PCR后做了克隆然后测序。但是测序结果很奇怪,因为我的序列中存在一段CAG的重复序列,每个人只有两个等位(一条来自父方,一条来自母
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  • 求助pcr问题
  • 北京市东城区东华门街道
  • 30.00
  • 诚意金悬赏
  • 630人参与 | 4人投稿
  •   已结束
  • 各位威客大神,最近我要扩增一段基因,从HALA细胞中提取RNA,该在冰上操作的也在冰上操作了,EP管是进口的,用之前高压了一遍,测得RNA浓度也挺高,都在4000ng/ul左右,然后逆转录成cDNA,测浓度在2000ng/ul左右,然后PCR, 94℃ 1min,
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  • ALP标记抗体按比例稀释后37度加速考察,发现灵敏度下降,不知何原因,如何解决?请高手帮忙解答!
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  • 最近做了ChIP-seq,得到原始数据.tdf格式的,想自己做下面这种可视化的图形图像,请问高手们有人知道用什么软件做吗?有没有具体方法?谢谢了。
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  • 这是我PCR过后跑的胶。每4个孔一个底物,从左往右第一个空是内参,后三个对应三个不同的引物,我用的50bp的Marker,引物已验证是好的,为什么下面还有好多二聚体?引物条带也没出来?
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  • 各位威客好,我们发现了一个点突变,是一个错义突变,现在想做:1.蛋白质的结构预测2.基因突变的功能验证请问有做过上述实验的威客吗?已经查了好多天的资料,实在是没有头绪,请各位威客指教。还有,如果想看这个突变
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  • 在NCBI上只有找到了“Bovinegrowth hormonegene, complete cds”和“Bovinegrowth hormonemRNA, complete cds”这样两篇帖子,如何确定BGH基因polyA的序列(用作终止序列)。
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  • 求各位科学威客指导,我需要将人VEGF165基因转染入兔干细胞内,转染后需要验证,我是需要验证人VEGF还是验证兔VEGF啊?另外,我需要转染的基因在兔干细胞内长期表达,这样的话我是选慢病毒转染还是重组腺病毒转染啊?谢谢
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  • 我现在在做长链非编码RNA研究肿瘤的发生的工作。目前测出了4对肿瘤和癌旁的差异的长链和microRNA。文献找到了对应肿瘤的原癌基因和抑癌基因。下一步需要验证。我想问,如何确定需要筛选的10几个差异明显的长链和小RNA?还有
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