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  • 对于传统的定量pcr了解不多,在网上看到内参照法:在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与
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  • 载体中的启动子与插入的目的序列中的起始密码子有冲突吗?在构建质粒的时候需要将目的基因的启示密码子去掉吗,如果不去掉会影响目的基因蛋白的表达吗,比如我将我的目的片段连接到EGFP-C3载体上去,显先是CMV启动子,然
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  • 本人新手,刚开始养THP-1细胞,使用的是1640(HyClone™)+10%FBS(Gibco)+1%双抗(Gibco)。刚复苏的时候细胞看着还挺好的,1000rpm, 4 min就可以离心下来,细胞圆润透亮,背景比较干净(7月19日图片)。可是传了一代之后,感觉细胞变
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  • 各位威客大神好,先说明一下我的问题,就是电泳后几块胶上无任何条带,只有染完的背景色,但是又有几块胶的条带是正常且清晰的。最近一直在跑聚丙烯酰胺电泳,一般是跑8块胶,24孔的。PCR体系是实验室一直用的,我用了
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  • 我提取肾皮质蛋白,上样100μg,这是第一次练手时候跑的,下面比较整齐的3个条带是sEH(60kD)。转膜条件:200mA,2h。脱脂奶封闭1h。一抗santa 1:500 4°过夜。TBST 4X10min。二抗1:5000室温孵育1h。TBST 3X10min。碧云天ECL发光得到此图。
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  • 请问各位威客大神,为什么分离大鼠心肌细胞时灌流没过几分钟,心脏就慢慢变白呢?挂心脏速度都挺快的,求建议!谢谢!
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  • 最近需要在小鼠肝脏上调一个基因表达,然后进行检测过表达效率和功能鉴定,用什么方法比较好呢,过表达效率别人说可以用QPCR,只用这个方法可靠吗,是否需要用其他方法呢,另外求一下小鼠体内基因上调用什么方法比较好,
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  • 最近要做小鼠股动脉RNA提取,长度5-10mm、直径约0.3mm,非常微小,用TRIZOL法提取RNA,发现用超声破碎仪很难把血管组织匀碎,加了乙醇后离心也没有看到沉淀,最后测浓度发现几乎没有RNA。请教各位大神,这么小的血管组织提RNA有
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  • 请问荧光定量PCR中是否有必要做空白对照,即不加模板,我问过很多人,他们实验室都不这样做,但是我们偶尔好奇做了空白对照,竟发现有CT值出现,对于加目的基因的引物,空白对照的溶解曲线峰值与目的基因一致,对加内参
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