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  • 最近在做Western Blot时遇到了白膜问题,希望各位前辈、战友能不吝赐教我的目的蛋白是BRCA1,预测分子量220KD,说明书上的样图实际分子量在250KD以上(换了三次抗体,三支抗体说明书都是这样标注的)全蛋白裂解、核蛋白裂解、
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  • 做了将2个月的WB,从第一次做我的所有条带都已经可以做出来了,而且每次的内参条带都不齐,目的蛋白也是看不出药效,不管是按BCA测蛋白浓度,还是按内参的灰度调整上样,或者是按照统一标准进行收样(六孔板细胞接种量
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  • 第一次做明胶酶谱,实验进行到现在不知道哪里出现问题,背景蓝色,条带也是蓝色,不明白为什么?实验条件:明胶终浓度为1mg/ml,56V进行电泳约60min,120V电泳2h,胶置于100ml洗脱液中,摇床高频震荡1小时,每15分钟更新一次洗
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  • 大家好,感谢肽度这么好的平台,小弟有个小问题,请教下大神,希望能获得满意的答案!问题如下:我现在有两个大小不同的蛋白处于同一个液体环境中。大小分别为22kDa和50kDa。我想用Sephadex G150来分离,有效分离范围是5000~30
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  • 我之前用3XFlag-opb(一个肽段,46个氨基酸)做Pull Down,对照组是转的乱序氨基酸的opb, 然后用Flag-beadsPull down后做考染发现,opb与对照组比,有一条特异性条带,送质谱后发现是一种甲基转移酶蛋白-P5,然后我构建了HA-P5,在细胞内同
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  • 看了一篇外文文献,文章研究的去除特定miRNA的小鼠可以提高多能干细胞到全能干细胞分化潜能,但文章没有说是如何去除的相关miRNA,请问现在想要做miRNA与靶基因的验证实验,去除miRNA都有什么方法。
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  • 载体是pET-28a,原核蛋白。13年表达非常好,保存质粒和菌株。16年上半年重新活化菌株,表达也非常好。最近重新活化菌株,竟然无表达。重新转化质粒,还是无表达!IPTG阳性对照没有问题。感受态BL21阳性对照没有问题质粒双酶切
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  • WB求救
  • 湖北省武汉市东西湖区
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  • LIMK1蛋白,蛋白分子量70kd上样量:50ug电泳:70v,110v 湿转:100v,2h脱脂奶封闭2h一抗:1:800(CST,说明书建议1:1000)GAPDH:1:500(说明书建议1:500)二抗:1:3000内参图:样品图:
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  • 这几张 PPT 里面有两个观点① 信号传递:当信号进入细胞质中后, 会经过信号通路中的一系基因将接 收到的信号逐步传递到下游,最终传递到细胞核中。② 受体激活之后,会使下面的蛋白依次激活: RAS-BRAF-MEK-ERK等,最终将信号传
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  • western问题
  • 江苏省南京市下关区
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 284人参与 | 2人投稿
  •   已结束
  • 最近搬了新的实验室,跑western时maker分离的太早,90v电压跑15分钟,maker就分开,之前二十多分钟才慢慢的分开,重复测了tris的PH ,都是对的。条带跑出来还马马虎虎1、电泳液反复重新配过2、丙烯酰胺买的 之前用的好好地3、AP
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  • 如题,蚕丝用1:2:8(CaCl2:酒精:水)放置在70℃的烘箱4h后得丝素蛋白液,然后想提纯丝素蛋白液,我使用的是纤维素酯膜CE(半透膜)透析,当我倒入丝蛋白质液到半透膜后,半透膜出现了皱缩,然后就是放入大烧杯中透析的
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  • WB做了挺久的,为什么现在出来的条带是这样的,颜色不齐,前面的这么浅,后面的这么深,感觉是转膜的问题吗,还是一抗的问题,之前都没有这样的情况发生。
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  • 想检测一个蛋白的表达情况,但由于该蛋白太大,没有抗体,无法进行Western,同时由于其具有多个转录本,不确定体内到底转录、翻译哪一个或几个转录本,也无法从RNA水平进行检测。请问:还有什么方法,能检测蛋白的表达情
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  • WB跑胶问题
  • 浙江省杭州市上城区
  • 10.00
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  • 228人参与 | 3人投稿
  •   已结束
  • 15%胶,电泳80v 40min,120v到底,湿转250mA转100min,5%no-fat milk block 60min,抗体1:1000溶解在5%BSA中,抗体是Abcam的,过夜孵育,二抗1:3000个人觉得:这样的拖尾跟抗体没有关系,是跑胶的问题,本实验室用的SDS-PAGE是将tris-HCL与SDS都溶在
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  • 各位威客大神好,小弟不才,最近定了一批蛋白,跑WB,内参不齐,于是又定了一次,发现蛋白浓度差异大,最大的3微克/微升,最小的0.5微克/微升,不知道怎么办了,这样的话还能做WB吗?请问有人遇到这样的问题吗?给小弟指
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  • wb问题
  • 山东省济南市历下区
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 231人参与 | 3人投稿
  •   已结束
  • 我们实验室敷二抗时用的是荧光二抗,平日里显影出来的条带也是荧光色的,可今日我显影出现的结果却如图,还请各位赐教!非常感谢!
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  • wb求助
  • 上海市黄浦区半淞园路街道
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 365人参与 | 4人投稿
  •   已结束
  • wb求助,为什么我的背景是这样的我同时跑了几个不同的基因,但是其中有一个抗体一直是这样的,其他的抗体背景很干净,求助一下各位大侠,这是神马原因?其实能看见条带的,但是背景就是不干净
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  • 在酵母双杂交文库构建过程中,构建后的文库中单个酵母中是有单个还是多个文库基因的,如果是单个文库基因那么是如何实现的?另外,一种目的蛋白可能和一种或者多种文库中的蛋白结合,如何区分涂布得到的多个菌落是来
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  • 请教wb片子这么脏是什么原因5%牛奶室温封闭2小时漂洗一遍后内参gapdh 1比800 4度过夜 10分钟洗膜三次二抗1比10000一小时洗膜十分钟3次请教大神们问题可能出在哪内参 牛奶 一抗 二抗别人用一样的背景很干净
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