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  • 我使用bl21iptg诱导蛋白表达,分子量11kd,诱导后有明显的目的条带,三次超声裂解后溶于8M尿素,然后过柱纯化。三次超声SDS胶显示蛋白存在于沉淀中,500ml诱导的菌量最后溶于10毫升尿素,10毫升蛋白悬液加入纯化柱后为一次纯化
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  • WB转膜
  • 广东省广州市越秀区
  • 10.00
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  •   1天后投稿截止
  • 我的转膜条件是湿转横流280MA,1.5h转出来,挨着膜的滤纸有红色marker以上的条带,第二张有红色以下的条带,第三张有最小的绿色的条带,膜上的所有marker颜色都很显,是转过了吗?我的分子量是106kd,38kd
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  • 质粒是Pet-41a(+) 插入了目的基因pEGF,这些前期准备我百分之百确定没问题,而且密码子也优化了,因为是在公司合成的,阅读框架什么的都没问题,正常导入了大肠杆菌BL21,我也确定已经导入了,在卡纳抗性下能生长,总之前期这
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  • 本人做WB这两次都出现了目的条带拖带,或者成了一片的状态,根本不能称之为条带了,但是转膜过程中Marker显示很好,但是有一张膜出现下面的Marker拖带,请问各位大神这是什么原因,是转膜问题还是胶的问题?求指点
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  • chip实验
  • 福建省福州市仓山区
  • 10.00
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  • 915人参与 | 3人投稿
  •   已结束
  • 我现在要做chip实验,目前转录因子没有现成的抗体,所以送出去制作。我想问抗体回来以后有4个小样,应该如何选择?
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  • 我打算寻找A蛋白的泛素化位点,目前已知A蛋白可以通过泛素化途径降解。通过共转染flag-A质粒与HA-ubiquitin各位点突变质粒(HA-K6,HA-K11,HA-K27,HA-K29,HA-K33,HA-K48,HA-K63,HA-WT,HA-KO),用flag抗体做IP,HA抗体检测泛素化,发现都有条带。
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  • 急求对“神经有毒性作用”的“HIV-1 TAT” 蛋白质的氨基酸序列,哪位大神知道怎么寻找吗?希望有相关文献支持,非常感谢!
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  • western曝光问题
  • 江苏省南京市下关区
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 290人参与 | 1人投稿
  •   已结束
  • 步骤如下,先把膜控干,然后放到自动曝光仪器推拉板中间,涂上ECL发光液,然后关上仪器门,立即点击曝光。上样前已定量,丽春红染色均匀,但有时候曝光内参明显不均匀(可排除内参本身不一致的问题),如果将膜用PBS洗
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  • CHIP实验问题
  • 江西省南昌市东湖区
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 288人参与 | 3人投稿
  •   已结束
  • 最近开始学习CHIP实验,固定细胞使其蛋白与DNA结合时用37%的甲醛至终浓度为1%,请问甲醛可以用4%的多聚甲醛代替吗,甲醛和多聚甲醛在固定细胞的应用上有什么区别吗?
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  • 请教:有什么办法可以单独分离培养上清中的分泌型蛋白,而不含或尽量少含外泌体的?另外一个问题,用ELISA检测培养上清中的某个蛋白成分,测出来的可能会是外泌体中的蛋白么,还是只是测到分泌的游离可溶性蛋白,因为没
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  • 编辑部意见:I can not find that you have a proper identification of the sugar you call aminogalactose. Please determine this in a better way. Secondly, if you consider resubmitting the paper, please give only one digit for the ratios of your monosaccharides, and also determine the linkages you
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  • 组织:小鼠骨骼肌内参:GAPDH 小鼠单克隆抗体该蛋白已经提了有两个月了,提后立即加5×SDS loding buffer煮沸5分钟 之后不用-20摄氏度保存。现在跑内参出现非特异性条带,我的蛋白降解了吗?其他同批次提的蛋白,单克隆抗体 也出
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  • Western问题求助
  • 北京市顺义区仁和地区
  • 10.00
  • 诚意金悬赏
  • 265人参与 | 2人投稿
  •   已结束
  • 本人拟跑Western,目标蛋白为ALPL(碱性磷酸酶),这个蛋白是本身就是酶,做Western时和其他蛋白好像是有区别的,求大神告知区别和注意事项!
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  • 最近一直在跑Western 没有跑出目的蛋白的条带,用的是lysis buffer 裂解的蛋白。但是我的目的蛋白是属于核内的蛋白,排除抗体原因,是不是我测不出来的问题是因为蛋白提取有问题?是不是要用ripa 来提取?请高手指导一下,谢谢
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  • 抗体说明书上显示的蛋白大小如图所示,蛋白分子量36kDa。而我WB中使用的biostep的marker,显示条带在35kd稍微下面一点,求大神解答,是否显出来的这个条带非目的条带?或者它是目的条带,但是marker显示有误差?
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  • 一直在做支原体菌体破碎后悬液OD260/OD280的测定,原来一直是在1.2-1.3之间,可最近有一批突然变到1.5了,请教各位大神是怎么回事啊???SDS-PAGE显示蛋白成分没有变化。
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  • 最近在做Western Blot时遇到了白膜问题,希望各位前辈、战友能不吝赐教我的目的蛋白是BRCA1,预测分子量220KD,说明书上的样图实际分子量在250KD以上(换了三次抗体,三支抗体说明书都是这样标注的)全蛋白裂解、核蛋白裂解、
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